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一、化合物基本信息
NHS-LC生物素是一种长链、NHS酯活化的生物素化试剂 ，用于标记伯胺（例如卵白赖氨酸） ，其膜通透性使其可用于一样平常细胞内标记 � ；腔鵑HS-LC生物素是水溶性的、不可切割的 ，可以对溶液中的抗体、卵白质和任何其他含伯胺的大分子举行简朴有用的生物素化试剂 ，细胞外貌卵白的特异性标记是这些奇异的水溶性和膜不可渗透试剂的另一个常见应用 。
Katsumi团队2001年揭晓《一种使尤≡盲生物素化和抗生物素卵白-生物素系统的新型血管内给药要领》 ，此项研究中开发了一种新型血管内给药系统 ，将从导管注射的药物牢靠到靶组织的血管系统中 ，活内皮细胞的细胞卵白首先通过生物素化试剂直接生物素化 ，然后通过亲和药物或使用亲和素作为讨论的生物素化药物团结 。
在最初的实验中 ，在体外研究了作育的牛自动脉内皮细胞（BAECs）的生物素化 ，要领是将生物素化试剂（NHS-LC生物素或磺基-NHS-LC生物素）应用于洗涤过的完整BAEC单层上 ，并批注与细胞团结的生物素量取决于所应用的生物素试剂的浓度 。将细胞裂解物中生物素的浓度除以裂解物中的卵白质浓度（ng生物素/μg卵白质） ，以使其值标准化 ，以应对实验历程中可能的细胞损失 。图1显示了生物素化试剂的剂量与细胞裂解物中校正的生物素浓度之间的关系 。细胞裂解物中生物素的浓度随着生物素化试剂剂量的增添而增添 。当在相同浓度下较量NHS-LC-生物素和磺基NHS-LC生物素时 ，NHS-LC生物素的生物素化的细胞卵白略多 。例如 ，由1.8mM NHS-LC生物素和磺基NHS-LC生物素制备的细胞裂解物的生物素浓度划分为0.390和0.304ng每1g卵白质 。
在生物素化后 ，细胞团结的生物素随着时间的推移而镌汰 ，当荧光素标记的亲和素（FITC-avidin）应用于生物素化的BAEC单层时 ，FITC-亲和素很容易与细胞团结 。LDH释放测定显示磺基NHS-LC生物素对BAEC只有稍微的细胞毒性 ，集落形成测定显示试剂只有稍微的不良反应 。对正常家兔的肾动脉举行了体内研究 ，通过导管将NHS-LC生物素溶液注射到一个肾脏 ，以生物素化其血管系统 ，并将载体注射到另一个肾脏作为比照 ，然后用盐水灌注 。最后 ，将FITC-avidin溶液注射到两个肾脏 ，然后在拔出导管后与血液再次融合 。在组织学切片中 ，生物素化肾脏中凌驾85%的肾小球被荧光素染色 ，而比照组中没有肾小球被染色 。在相同手术后2天收罗的肾脏中 ，大大都肾小球仍然染色明亮 。图2显示 ，在生物素化后 ，EC中的生物素浓度随着时间的推移而降低 。当使用磺基NHS-LC生物素时 ，生物素化卵白的浓度随着时间的推移迅速下降 ，24小时后只剩下少量 。另一方面 ，当使用NHS-LC-生物素时时 ，在24小时内检测到大宗的生物素分子（60%） ，在48小时时仍能检测到约40% 。凭证数据盘算出的生物素半衰期划分为38.0小时（NHS-LC生物素）和10.8小时（磺基-NHS LC-生物素） 。
在用0.18-18mM的磺基NHS-LC生物素和袒露于溶剂中举行比照 ，生物素化24小时后通过相差显微镜检查了所有的BAEC ，所有组的细胞均为阴性 ，未显示任何形态异常 。另一方面 ，如图3所示 ，与低剂量（0、0.18和1.8mM）的生物素化相比 ，袒露于18mM生物素化试剂的组显示LDH水平略有增添（克鲁斯卡尔-沃利斯磨练 ，p＜0.02） 。
为了研究生物素化抑制剂是否会改变细胞活性 ，使用集落形成测定法检测了它们对细胞增殖的影响 。如图4所示 ，BAEC集落的数目随着试剂浓度的增添而镌汰 。菌落形成的抑制在1.8-5.4mM时是显着的（克鲁斯卡尔-沃利斯磨练磨练 ，p<0.01） 。
在这个实验中 ，还研究了抗生物素化药物是否可以牢靠在有活力的生物素化EC上 。效果如图5所示 ，细胞裂解物中FITC抗生物素的浓度随着FITC抗病毒素初始剂量的增添而增添 。当使用NHS-LC生物素时 ，FITC-avidin的初始剂量与其在细胞裂解物中的浓度之间的相关系数为0.987（p=0.012） ，而当使用磺基NHS-LC-生物素时为0.977（p=0.026） 。
在最终的实验中 ，生物素化的肾脏注射抗生物素溶液 ，然后注射荧光素-生物素溶液 。比照肾脏先前没有生物素化 ，但接受了与上述相同的抗生物素和荧光素生物素注射 ，凌驾80%的肾小球在生物素化的肾脏中染色 ，但在比照组中没有染色 。这批注生物素化药物可以通过抗生物素锚定在生物素化血管系统上 ，而不会被血液冲走 。生物素化肾脏的功效未发明显着的不良反应 ，这种给药系统适用于治疗某些血管病理状态 ，如恶性肿瘤中的微血管增殖 ，以及在某些靶器官中一连给药 。
在这项研究中 ，研究了活内皮细胞的生物素化 ，以开发一种将治疗药物递送到靶区并将药物锚定到该区域的血管内皮细胞的要领 。这项研究的两个要害要素是导管插入术在药物递送中的应用和NHS酯的生物素衍生物在生物素化中的使用 。介入放射学的最新希望使得使用血管导管插入术抵达身体的许多地方成为可能 ，使用导管插入术 ，我们将药物运送到作为模子器官的兔肾脏中的血管内皮细胞 。一些研究职员之前已经报道了动物组织细胞的生物素化 ，如红细胞、淋巴细胞和内皮细胞 ，使用生物素NHS酯衍生物用于种种目的 。NHS酯与卵白质具有高度反应性 ，与NHS酯的化合物可以通详尽胞卵白质牢靠在活细胞上 。Fuente等人报道了使用疏散的肺对肺内皮举行生物素化 ，然后通过血管内注射给予生物素化试剂 。Katsumi团队的研究首次将血管内皮细胞的生物素化用于治疗目的 。
